Как отмыть эритроциты для определения антител
ОТМЫТЫЕ ЭРИТРОЦИТЫ
Определение
Компонент, полученный из цельной крови центрифугированием
и удалением плазмы с последующим отмыванием эритроцитов
изотоническим раствором.
Характеристики
Компонент представляет собой взвесь эритроцитов, из которой
в основном удалены плазма, лейкоциты и тромбоциты. Количество
остаточной плазмы зависит от протокола отмывания. Гематокрит
может быть различным в зависимости от клинической необходимости.
В каждой дозе по окончании переработки должно содержаться
не менее 40 г гемоглобина.
Методы получения
После центрифугирования и максимального удаления плазмы
и лейкотромбослоя эритроциты обрабатываются последовательным
добавлением холодного (+4 оС) изотонического раствора
и (предпочтительно рефрижераторным) центрифугированием.
Функционально закрытая система может быть приготовлена
с использованием устройства для стерильного соединения
трубок полимерных контейнеров.
Маркировка
Маркировка должна соответствовать принятым государственным
законам и международным соглашениям. На этикетке или в
сопровождающей аннотации должны быть отражены следующие
сведения:
— время приготовления и срок годности;
— название и объем компонента;
— наименование и адрес производителя (четкий текст или
код);
— номер донации;
— группа по системе АВО;
— принадлежность по системе Rh (D), указывая «Rh
(D)-положительный», если D-положительный или «Rh
(D)-отрицательный», если D-отрицательный;
— состав и объём ресуспендирующего раствора;
— температура хранения;
— что компонент не может быть использован для переливания
при наличии аномального гемолиза или других повреждениях;
— что компонент должен быть перелит через фильтр с размером
пор 170-200 мкм.
Хранение и стабильность
Компонент должен храниться при температуре от +2 оС до
+6 оС. Время хранения после отмывания должно быть максимально
сокращено: не более 24 ч, если отмывание и хранение проводилось
при +4 оС и не более 6 ч, если отмывание и хранение проводилось
при комнатной температуре.
Обеспечение качества
Таблица: Контроль качества
Аналогично цельной крови за исключениями, указанными
в табл.
Параметр, который необходимо | Требования качества (спецификация) | Частота проведения контроля | Кем осуществляется контроль |
| Объем | Определяется используемой системой | все дозы | Отдел переработки |
| Гематокрит | от 0,65 до 0,75 | все дозы | Лаборатория контроля качества |
| Гемоглобин | Не менее 40 г/доза | все дозы | Лаборатория контроля качества |
| Гемолиз в конце хранения | Не более 0,8 % эритроцитов | все дозы | Лаборатория контроля качества |
| Количество белка в конечной надосадочной жидкости | Не более 0,5 г/доза* | все дозы | Лаборатория контроля качества |
* количество белка в конечной надосадочной жидкости должно
обеспечить содержание IgA менее 0,2 мг/доза.
Транспортировка
Транспортировка ограничена коротким периодом хранения.
Условия хранения должны поддерживаться во время транспортировки.
Требуется строгий контроль времени и температуры.
Показания к применению
Отмытые эритроциты показаны для замещения эритроцитов
у пациентов с антителами к белкам плазмы, особенно анти-
IgA, а также у пациентов с тяжелыми посттрансфузионными
аллергическими реакциями.
Меры предосторожности
С использованием установленного метода должна быть верифицирована
совместимость отмытых эритроцитов и пациента, которому
они предназначены.
Так как при приготовлении компонента возможен перенос
в другой контейнер, надлежит принять меры к корректной
идентификации всех соответствующих доз и образцов для
постановки проб на совместимость.
Побочные эффекты
— циркуляторная перегрузка;
— гемолитическая посттрансфузионная реакция;
— сифилис может быть передан, если компонент приготовлен
из дозы крови, которая хранилась менее 96 ч при температуре
от +2 оС до +6 оС;
— передача вирусов (гепатит, ВИЧ и т.д.) возможна, несмотря
на тщательность отбора доноров и проводимые исследования;
— в редких случаях возможна передача паразитарных инфекций
(например, малярии.);
— сепсис как результат непреднамеренной бактериальной
контаминации;
— передача других патогенов, которые не исследуются
или еще неизвестны.
На главную
Содержание
- Показания
- Подготовка к анализу и забор материала
- Нормальные значения
- Повышение значений
- Снижение значений
- Лечение отклонений от нормы
Анализ на аллоиммунные антиэритроцитарные антитела – лабораторное исследование, направленное на выявление в резус-отрицательной крови антител к резус-фактору – специфическому белку, который находится на поверхности эритроцитов резус-положительной крови. Показатель имеет самостоятельное диагностическое значение, исследование проводится после получения результатов анализов на определение группы крови и резус-фактора. Данные используются для выявления резус-конфликта матери и плода, определения необходимости введения инъекций иммуноглобулина беременной с резус-отрицательной кровью. Материалом для исследования является венозная кровь. Титр антирезусных антител выявляется при помощи реакции агглютинации. В норме, при низкой вероятности резус-конфликта, результат отрицательный. Готовность результатов анализа составляет 1 рабочий день.
Анализ на аллоиммунные антиэритроцитарные антитела – лабораторное исследование, направленное на выявление в резус-отрицательной крови антител к резус-фактору – специфическому белку, который находится на поверхности эритроцитов резус-положительной крови. Показатель имеет самостоятельное диагностическое значение, исследование проводится после получения результатов анализов на определение группы крови и резус-фактора. Данные используются для выявления резус-конфликта матери и плода, определения необходимости введения инъекций иммуноглобулина беременной с резус-отрицательной кровью. Материалом для исследования является венозная кровь. Титр антирезусных антител выявляется при помощи реакции агглютинации. В норме, при низкой вероятности резус-конфликта, результат отрицательный. Готовность результатов анализа составляет 1 рабочий день.
Антиэритроцитарные антитела – иммуноглобулины, которые вырабатываются к различным группам антигенов эритроцитов. Эти антигены относятся к структурным образованиям клеток крови, расположены на внешней поверхности мембран. По своей химической природе они разнообразны – часть представлена белками, другая гликопротеинами, третья – гликолипидами. Их наличие или отсутствие передается по наследству и в течение жизни не меняется. На состояние здоровья набор антигенов никак не влияет. Если в кровь к человеку, у которого отсутствуют антигены эритроцитов определенного типа, перелить кровь с такими антигенами, то организм выработает антитела – разовьется иммунный ответ. Такие ситуации возникают после гемотрансфузий, выполненных без предварительного анализа на антитела к резус-фактору, а также при попадании антигенов крови плода в кровоток беременной.
Своевременное выявление антиэритроцитарных антител в крови необходимо для предупреждения развития резус-конфликта, последствиями которого являются гемолитические реакции, то есть разрушение эритроцитов донора. При беременности возможно ее спонтанное прерывание на различных сроках. Наибольшее распространение исследования антител к резус-фактору приобрело в акушерско-гинекологической практике как инструмент для мониторинга беременностей у женщин с резус-отрицательной кровью. Вовремя проведенная вакцинация анти-D гамма-глобулином позволяет избежать развития резус-конфликта и связанных с ним осложнений. Кроме этого, исследование антител к резус-фактору востребовано в хирургической и реаниматологической практике как часть подготовки пациентов к гемотрансфузиям. Для проведения анализа на антиэритроцитарные антитела забор крови выполняется из вены. Распространенным методом исследования является реакция агглютинации на буферном геле.
Показания
Скрининговый анализ на антиэритроцитарные антитела в крови применяется для профилактики внесосудистого гемолиза после гемотрансфузий, для предупреждения развития фетального эритробластоза плода. По результатам теста выявляются аллосенсибилизированные пациенты, назначается необходимое лечение. В рамках подготовки к беременности и ее мониторинга тест на антитела к резус-фактору выполняется с определенной периодичностью. Исследование показано матерям с резус-отрицательной кровью при условии, что существует вероятность передачи положительного резус-фактора от отца к ребенку. Особенно тщательный контроль антиэритроцитарных антител требуется женщинам, которые уже были иммунизированы ранее – имели беременности с резус-конфликтом, в том числе окончившиеся абортом или выкидышем, перенесли гемотрансфузии. Также риск развития резус-конфликта выше у пациенток с осложнениями беременности, приводящими к нарушению целостности или повышению проницаемости плаценты. Вероятность проникновения эритроцитов плода увеличивается при отслойке плаценты, травмах живота, инфекциях, инвазивных вмешательствах на матке. На основании результатов анализа делается вывод о риске развития резус-конфликта и необходимости введения иммуноглобулиновых инъекций.
К другим показаниям для выполнения анализа на антитела к резус-фактору относятся привычное невынашивание беременности и гемолитическая болезнь новорожденных. Результаты исследования позволяют подтвердить или опровергнуть роль резус-конфликта в развитии патологии. В хирургии, реаниматологии и смежных областях анализ на антитела к резус-фактору показан при подготовке к гемотрансфузиям, а также через 15-30 суток после процедур. По данным исследования определяется сенсибилизация к антигенам и возможность переливания крови конкретного донора.
Анализ на антиэритроцитарные антитела не показан, если женщина с отрицательным резус-фактором крови вынашивает ребенка, отец которого также имеет резус-отрицательную кровь. В этих случаях у плода резус-фактор всегда отрицательный, иммунологический конфликт не развивается. Результаты исследования могут оказаться положительными при отсутствии резус-конфликта, если инъекция антирезусного иммуноглобулина была введена женщине менее чем 6 месяцев назад. Еще одним ограничением анализа является его чувствительность – в небольших концентрациях антирезусные антитела не поддаются определению. Несмотря на это, прогностическая ценность исследования очень высока – его результаты позволяют выявить риск возникновения резус-конфликта и предупредить его развитие.
Подготовка к анализу и забор материала
При выполнении анализа на антиэритроцитарные антитела биоматериалом является венозная кровь. Процедура забора, как правило, выполняется с утра, но строгих требований ко времени ее проведения нет. Подготавливаться к сдаче крови не нужно. Рекомендуется выдержать перерыв после еды не менее 4 часов, а последние 30 минут перед процедурой провести в спокойной обстановке, без эмоциональных и физических нагрузок. Кровь берут из локтевой вены методом пункции, помещают в герметичную пробирку и в течение нескольких часов направляют в лабораторию.
Антитела к резус-фактору определяются в крови методом агглютинации с использованием геля фильтрации. В ходе процедуры сыворотка с эритроцитами вводится в верхнюю часть микропробирок с гелем. Затем их инкубируют и центрифугируют. В результате агглютинированные эритроциты (те, что соединены с антиэритроцитарными антителами) из-за увеличенного размера не проходят сквозь гель и остаются на его поверхности. Если антител нет, то эритроциты легко опускаются через гель на дно пробирки. Таким образом, по характеру распределения эритроцитов определяется наличие антител к резус-фактору. Сроки исполнения анализа составляют 1 рабочий день.
Нормальные значения
В норме результат анализа на антиэритроцитарные антитела отрицательный (-). Это значит, что в исследуемом образце крови антител нет, вероятность развития резус-конфликта низкая. На итоговый показатель не оказывают влияния физиологические факторы, такие как режим физической активности или особенности питания. К получению ложных результатов может привести неправильное хранение и транспортировка образца крови.
Повышение значений
При наличии в крови беременной антиэритроцитарных антител результат анализа положительный. В этом случае проводится их полуколичественное исследование. В зависимости от силы реакции агглютинации в геле результат может быть сильноположительным (++++), положительным (+++), слабоположительным (++), очень слабоположительным (+). Причина увеличения значений анализа на антиэритроцитарные антитела – сенсибилизация организма к резус-фактору. Она свидетельствует о повышенном риске прерывания беременности, о риске развития эритробластоза новорожденного и осложнений после гемотрансфузий.
Снижение значений
Отсутствие антител к резус-фактору в крови является нормой и указывает на отсутствие риска развития резус-конфликта. Если антитела были определены ранее, то причиной снижения значений анализа является введение анти-D гамма-глобулина.
Лечение отклонений от нормы
Анализ на антиэритроцитарные антитела имеет диагностическое и прогностическое значение в акушерско-гинекологической практике. Его результаты дают возможность выявить риск развития иммунологического конфликта у беременной женщины с резус-отрицательной кровью и своевременно ввести иммуноглобулин. Такая мера позволяет избежать дальнейших осложнений: гемолитической болезни плода или новорожденного, выкидыша, преждевременных родов. С результатами анализа необходимо обратиться к акушеру-гинекологу, ведущему беременность.
Источник
С целью обеспечения иммунологической и вирусной безопасности реципиентов при проведении гемотрансфузионной терапии, в Красноярском Краевом центре крови №1 с 2004 г. осуществляется приготовление отмытых эритроцитов (эритроцитной взвеси с физиологическим раствором).
Отмытые эритроциты представляют собой эритроцитную среду, лишенную плазмы, лейкоцитов и тромбоцитов путем 1-5-кратного повторного добавления физиологического раствора и удаления надосадочной жидкости после центрифугирования. В процессе отмывания удаляются белки плазмы, лейкоциты, тромбоциты, микроагрегаты стромы и клеток, разрушенных в процессе хранения.
Процесс приготовления
• Компонент крови получают из эритроцитной взвеси (массы) посредством трехкратного добавления стерильного 0,9% раствора хлорида натрия. После каждого добавления физиологического раствора эритроцитную массу осаждают методом центрифугирования, удаляют надосадочную жидкость, добавляют 0,9% раствор хлорида натрия.
• 1 доза (пакет) содержит в среднем 2/3 эр.массы + 1/3 физиологического раствора (количество указывается на этикетке мешка с компонентом крови).
• Продолжительность процесса приготовления отмытых эритроцитов составляет около 2-х часов.
Хранение
Отмытые эритроциты (эритроцитная взвесь с физиологическим раствором) должны храниться при температуре от +2 до +6оС и подлежат переливанию в течение 24 часов с момента приготовления.
Основные преимущества применения
• Снижение риска развития посттрансфузионных реакций и осложнений (в процессе отмывания удаляются белки плазмы, лейкоциты, тромбоциты, микроагрегаты клеток и строма разрушенных клеточных элементов).
• Снижение риска передачи инфекционных и вирусных заболеваний (ВИЧ-инфекция, сифилис, вирусные гепатиты, цитомегаловирусная инфекция, герпес и др.)
• Снижение риска развития цитратной интоксикации и гиперкалиемии при массивных трансфузиях (при отмывании удаляется калий и антикоагулянты, входящие в состав гемоконсерванта).
• Профилактика развития аллоиммунизации при выявлении антител к лейкоцитам.
• Суточная приживаемость эритроцитов с выполнением газотранспортной функции составляет не менее 70%.
• Гематокрит в конечном продукте составляет от 0,45 до 0,70 г/л.
Категории больных, которым рекомендовано использование отмытых эритроцитов (эритроцитной взвеси с физиологическим раствором):
• Новорожденные и дети до 3-х лет;
• Беременные, роженицы и родильницы;
• Больные, имеющие отягощенный акушерский, трансфузиологический и аллергологический анамнезы;
• Больные, у которых выявлены антитела к белкам плазмы крови, особенно анти-Ig A, или наблюдались аллергические реакции после введения продуктов плазмы.
• Больные с анемией различной этиологии, сопровождающейся сенсибилизацией реципиента к антигенам белков плазмы, лейкоцитов и тромбоцитов в результате повторных переливаний компонентов крови или беременности.
• Больные, нуждающиеся по показаниям в многократных гемотрансфузиях (за короткий период более 1 литра эр.сред);
Показания и противопоказания к переливанию
(всех эритроцитсодержащих сред):
• Восстановление кислородтранспортной функции крови при лечении острой массивной кровопотери 25%-30% ОЦК, сопровождающейся снижением уровня гемоглобина ниже 70г/л–80г/л, гематокрита — ниже 25%, и возникновением циркуляторных нарушений.
• Травматический, ожоговый или операционный шок.
• Массивные и обменные гемотрансфузии, в т.ч. при обширных травмах и оперативных вмешательствах.
• Острые постгеморрагические анемии (травмы с кровопотерей, желудочно-кишечные кровотечения, кровопотери при хирургических операциях, родах и др.).
• Анемии, сопровождающие хронические заболевания ЖКТ и других органов и систем, анемии при интоксикациях, ожогах, гнойно-септических заболеваниях, а также при заболеваниях почек.
• Анемии, сопровождающие угнетение эритропоэза (острые и хронические лейкозы, апластический синдром, миеломная болезнь, почечная недостаточность).
• Тяжелые формы железодефицитных анемий, особенно у лиц пожилого возраста и при выраженных изменениях гемодинамики.
• Тяжёлые реакции на повторные переливания крови, аллергопатии, наличие антилейкоцитарных, антитромбоцитарных антител и антител к белкам плазмы.
• Склонность к тромбозам и эмболиям (при наличии жизненных показаний к гемотрансфузиям).
• Подготовка к трансплантации органов.
• Для заполнения аппарата искусственного кровообращения и аппарата «искусственная почка».