Как отмыть предметные стекла

Источник

Консультант по гематологии, цитохимии и микробиологии

ООО НПФ «АБРИС+»

Горностаев С.Н.

Морфологическая диагностика заболеваний отличается наибольшей достоверностью и многие старые и новые методы лабораторной диагностики, имеющие очень большое значение, особенно в совокупности, не могут исключить морфологические методы исследования из клинической практики. Вместе с тем морфологические исследования в клинике приобретают особую значимость, если анализируются в сопоставлении со всеми данными клиники во всем их объеме.

Чтобы максимально обеспечить интересы клиники, интересы конкретного больного человека, морфологический диагноз должен быть предельно точным и объективно отражающим особенности конкретного заболевания.

В настоящее время успехи в обеспечении здоровья населения во многом зависят от проведения массовых профилактических осмотров и в первую очередь групп с повышенным риском различными заболеваниями, особенно злокачественными новообразованиями.

Важным аспектом клинического обследования является внимательное и полное изучение клеточной морфологии. Почти каждое заболевание, поражающее клетки крови, может быть визуализировано либо в форме цитологических изменений морфологии клеток, либо сдвигами распределения разных типов клеток. Разные области медицины объединяют методы исследований и постановки диагноза, а именно – морфологический анализ окрашенных препаратов с помощью микроскопов.

Хорошо известно, что правильная и качественная окраска мазков крови и костного мозга имеет большое значение для точной оценки изменений морфологии клеток. В связи с этим качественные препараты периферической крови и костного мозга играют важную роль в диагностике и контроле лечения гематологических заболеваний.

Морфологический анализ включает в себя три основных пункта:

· преаналитический этап (подготовка пациента к исследованию, забор биоматериала, подготовка препарата)

· аналитический этап (фиксация и окрашивание)

· постаналитический этап (микроскопическое исследование клеточных элементов)

Приготовление препаратов возможно двумя способами: ручным и с помощью автоматов и центрифуг. Существующие автоматические устройства для приготовления и окраски мазков позволяют стандартизовать условия и повысить качество препаратов, однако автоматический способ пока не нашел широкого распространения в наших лабораториях, поэтому напомним некоторые постулаты «ручного» метода. Не касаясь вопросов, как подготовка пациента к забору биоматериала, непосредственно забор биоматериала и доставка к месту исследования, которые сами по себе очень важны, коснусь вопросов дальнейшего использования полученных материалов.

Особенности преаналитического этапа при гематологических и цитохимических исследованиях состоят из:

1. Правильной и качественной подготовки стекол для исследования.

2. Правильно приготовленного препарата.

3. Правильно подобранных и использованных антикоагулянтах.

4. Условий хранения нефиксированных препаратов.

5. Подбор фиксаторов и красителей для фиксации и окраски препаратов, режимов для фиксации и окраски.

6. Использование «забуференной» воды для приготовления рабочих растворов.

Одна из составляющих преаналитического этапа – это правильная и качественная подготовка стекол для исследования.

Правильная оценка морфологических особенностей возможна лишь на хорошо приготовленных и надлежащим образом окрашенных мазках. То есть стекла не только должны быть хорошо отмыты, но и обезжирены. Это касается как новых стекол, так и уже использованных, что чаще встречается. Предметные и покровные стекла должны быть безупречно вымыты и обезжирены. В настоящее время российскими производителями предметные стекла, не нуждающиеся в обезжиривании, не выпускаются. Импортные стекла, не нуждающиеся в очистке и обезжиривании, имеют маркировку «pre cleaned».

Новые стекла могут использоваться без предварительной обработки, необходимо лишь обезжиривание в смеси состоящей из равных частей спирта и эфира. Ранее использованные стекла замачиваются в растворе стирального порошка или мыла с перекисью водорода, после чего, спустя сутки, промываются проточной водой, заливаются раствором стирального порошка или мыла и доводятся до кипения, по окончании процедуры промываются проточной водой с щеткой, затем высушиваются и опять же помещаются в смесь спирта и эфира.

Несмотря на многообразие различных чистящих и дезинфицирующих средств, проблема очистки и обезжиривания предметных и покровных стекол была и остается актуальной. Несколько лет назад проблема решалась достаточно просто – в лаборатории можно было самому приготовить так называемую смесь Никифорова – смесь для обезжиривания стекол, одной из составляющих которой был диэтиловый эфир, с которым в лаборатории особых проблем не возникало до поры до времени. Однако диэтиловый эфир в недавном прошлом был запрещен к использованию, поэтому сразу возникла проблема «чистых» стекол. Не секрет, что плохо отмытые и обезжиренные стекла искажают правильную окраску клеток, либо не прокрашивая какие-либо клеточные элементы, либо превращая процедуру подготовки мазка к исследованию в многократное перебирание нужных и подходящих стекол. Идя навстречу пожеланиям врачей-лаборантов, мы предлагаем новую смесь для очистки и обезжиривания стекол Диахим-Профиклин, по своим обезжиривающим свойствам не уступающей смеси Никифорова, а учитывая, что составляющие этой смеси не пожароопасны, то и превосходящей по использованию. Операция по обезжириванию проста — достаточно поместить в эту смесь очищенные и промытые стекла (как новые, так и бывшие в употреблении) на несколько часов, после чего извлечь стекла, протереть насухо и хранить в сухом месте. Смесь многократного использования, не требует особых условий хранения, за исключением проветриваемого или вентилируемого помещения. Надеемся, что применение этой смеси в лабораторной практике значительно упростит процедуру морфологического анализа и поможет устранить одну из вероятных ошибок на стадии преаналитического этапа, ведь в работе врача-лаборанта мелочей не бывает….

Для проверки качества очистки и обезжиривания можно капнуть дистиллированной водой на предметное стекло, на хорошо очищенном и обезжиренном стекле капля растекается, если недостаточно обезжирено — вода собирается в капли. Возможно также воспользоваться так называемой фенолфталеиновой пробой, предназначенной для определения остаточных количеств щелочных компонентов моющих препаратов на изделиях медицинского назначения. На контролируемое изделие (предметное стекло) наносят 2-3 капли спиртового раствора фенолфталеина или протирают его тампоном, смоченном в реактиве. При наличии на изделиях медицинского назначения остатков моющих средств раствор фенолфталеина окрашивается в розовый цвет.

Источник

В современных научных работах, исследованиях, а также анализах в области ветеринарии бывает довольно сложно обойтись без использования такого прибора как микроскоп. С его помощью можно во много раз увеличить рассматриваемый объект, получить наглядное изображение структуры исследуемого образца, измерить его микроскопические линейные размеры, узнать свойства и качественные показатели живых структур и многое другое. Для работы с микроскопом производится приготовление так называемого микропрепарата, представляющего собой предметное стекло с нанесенным на него образцом исследуемого объекта, например, капли крови или кусочков тканей, жидкостей или органов животных. Сверху предметное стекло обычно накрывается другим стеклом меньшего размера. Называется оно покровным.

Приготовление микропрепарата обычно не вызывает трудностей и заключается в нанесении на предметное стекло образцов крови, колоний микроорганизмов или других биологических веществ. Далее сверху на предметное стекло накладывается тонкое покровное стекло, служащее для равномерного распределения изучаемого материала по пространству между двумя стеклами. Иногда образцы смешивают с вазелиновым маслом, растворами щелочей, глицерина или хлорида натрия для разжижения, изменения оптических характеристик, либо предохранения от высыхания. После всех проделанных операций можно устанавливать микропрепарат в микроскоп и проводить необходимые наблюдения.

Размеры предметных стекол, а также их толщина стандартизированы, что облегчает хранение и работу с ними. Предметное стекло представляет собой прямоугольник длиной 75 мм, и шириной – 25 мм. Толщина колеблется в пределах от 1 до 1,2 мм. Важно, чтобы предметное стекло было идеально гладким, а толщина его была равномерной. Кроме того, рекомендуется использовать при изготовлении бесцветное стекло, в иных случаях появляется вероятность проявления различных оптических погрешностей и искаженного цветовосприятия при рассматривании через микроскоп. Совершенно недопустимо наличие пузырьков воздуха в стекле. Края предметных стекол должны быть ровными, в идеале – отшлифованы. Очень часто для удобства нанесения образцов в предметном стекле в центре делается небольшое углубление в форме гладкой круглой или овальной лунки. Также предметные стёкла делятся на обычные стёкла и предметные стёкла с областью для маркировки.

Покровные же стекла, в отличие от предметных, изготавливаются различных размеров, но все они представляют собой тонкую пластинку квадратной формы, служащую для накрывания образцов микроскопических препаратов. Важным требованием для покровных стекол является абсолютно ровная и гладкая поверхность и равномерная толщина по всей площади. Наиболее предпочтительными в микроскопии являются стекла с размерами 18х18 мм, 20х20 мм и 24х24 мм, что, однако, не исключает и использование стекол иного размера.

Стекла покровные имеют толщину от 0,10 до 0,25-0,30 мм, но в среднем она колеблется в пределах 0,15-0,18 мм. Встречаются также покровные стекла круглой или прямоугольной формы, однако никаких преимуществ по сравнению с квадратными у них нет.

Далее приведены некоторые требования, предъявляемые при производстве покровных стекол:

Изготавливаться покровные стекла должны из прозрачного бесцветного силикатного стекла, однако может допускаться голубой оттенок;
Покровные стекла должны обладать химической стойкостью к действию соляной кислоты и дистиллированной воды;
Покровные стекла не должны содержать в себе каких-либо физических дефектов, как то: царапины, пузырьки, сколы.

Стоит также заметить, что предметные и покровные стекла в период их эксплуатации лучше использовать однократно, но допускается и многократное использование. При многократном использовании они должны быть аккуратно и тщательно вымыты (с мыльными и дезинфицирующими растворами, после чего их следует промыть проточной водой), а непосредственно перед работой в отдельных случаях их рекомендуется обезжирить (например натереть 96% спиртом). Качество обезжиривания можно проверить, капнув на предметное стекло воду из пипетки: по обезжиренному стеклу вода растекается тонким слоем, а не собирается в каплю. При хранении следует избегать прямого контакта с абразивными материалами, например с частицами песка или порошками металлов. Повреждённые и битые стёкла подлежат утилизации.

Для нанесение надписей на стёкла, маркировки образцов следует использовать специальные маркеры по стеклу, которые водоустойчивы, а также не растворяются в спирте и ацетоне.

Для хранения и превозки стёкол с препаратами можно использовать специальные транспортные контейнеры, файлы, картонные и пластиковые планшеты.

Please reload

Недавние посты

Поиск по тегам

Мы в соцсетях

Источник

Очень важным моментом в работе является подбор предметных и покровных стекол для препаратов. От толщины стекол зависит правильная фокусировка препаратов. Световой микроскоп имеет объективы с определенным рабочим состоянием (у иммерсионных объективов оно равно 0,1-0,12 мм). Ясно, что этими объективами можно воспользоваться в том случае, если толщина предметного и покровного стекол не выходит за допустимые величины, а именно 1-1,2 мм для предметных и 0,17 мм для покровных стекол. Кроме того, стекла должны иметь ровную поверхность, без мутных пятен и царапин.
Обязательный момент – чистота стекол. Нормальная окраска возможна при условии использования абсолютно чистых стекол.
Обычно предметные стекла готовят так: кипятят в мыльной воде, промывают в водопроводной и опускают в хромовую смесь. В этой смеси стекла выдерживают 2-24 часа. Хромовую смесь хранят в широком стеклянном сосуде, из которого стекла вынимают пинцетом и промывают проточной и дистиллированной водой. Иногда предметные стекла очищают спиртом и бензином, а затем прожигают с одной стороны на пламени спиртовки. У чистых стекол поверхность полностью смачивается водой и не видно никаких жирных следов. Вода легко расплывается по их поверхности, не образуя капель шаровидной формы. Отобранные стекла помещают в стакан с дистиллированной водой, где они находятся до употребления.

Покровные стекла отбирают размером 20 х 20, 18 х 18, 24 х 24 мм. Чистят покровные стекла в смеси спирта и эфира, вытирают мягкой тряпочкой и хранят в сухом виде до использования.
^ 4. Стерилизация стеклянной посуды

Основной способ стерилизации стеклянной посуды – обработка сухим горячим воздухом при температуре не выше 1800 С в течение 1- 3 ч (таблица).

Таблица – Условия стерилизации стеклянной посуды сухим жаром

Температура, 0 С	Время, мин
140	180
150	150
160	120
170	60

При этом погибают и вегетативные клетки и споры микроорганизмов. Стерилизацию осуществляют в специальных суховоздушных (сухожаровых) сушильных шкафах, приспособленных для стерилизации. Они различаются по форме и способе обогрева, но имеют сходное устройство. Их делают из термостойких материалов – обычно из металла и асбеста. Внутри стерилизатора имеются полки для размещения посуды, а наверху – отверстие, в котором с помощью пробки укрепляют термометр. В верхней части сушильных шкафов также имеется отверстие для вентиляции, которое при стерилизации закрывают. Стерилизаторы и шкафы с электрическим обогревом снабжены терморегулятором, обеспечивающим автоматическое поддержание необходимой температуры.

Подготовка посуды к стерилизации.

Посуда перед стерилизацией должна быть тщательно вымыта и завернута в бумагу для сохранения стерильности после прогревания. Также завертывают в бумагу чашки Петри, пипетки. Колбы, пробирки закрывают ватными пробками. На пробки можно надеть бумажные колпачки, предохраняющие горлышко от пыли. Посуду развертывают непосредственно перед употреблением.

Стерилизация.

Посуду, подготовленную для стерилизации, загружают в стерилизатор (или сушильный шкаф) не слишком плотно, чтобы обеспечить циркуляцию воздуха и равномерный надежный прогрев стерилизуемого материала. Стерилизатор (сушильный шкаф) во время работы должен быть плотно закрыт. При отсутствии терморегулятора необходимо строго следить за температурой, так как при ее понижении не осуществится стерилизация, а при нагреве выше 1800 С бумага и пробки начинают обугливаться. По окончании стерилизации шкаф не открывают до тех пор, пока температура в нем не упадет до 800 С, поскольку при резком охлаждении иногда нарушается стерильность материала, а сильно нагретое стекло может растрескаться. Лучше всего выгружать посуду, когда температура в стерилизаторе сравняется с комнатной.
Посуду можно стерилизовать и в автоклаве. Режим стерилизации в этом случае существенно зависит от объема сосудов и толщины стекла. Для автоклавирования посуду готовят, как и для сухожаровой стерилизации. Следует иметь в виде, что в автоклаве посуда увлажняется.

Мелкие металлические инструменты : петли, иглы, пинцеты, ножницы, шпатели – стерилизуют прокаливанием в пламени (т.е. нагреванием докрасна) непосредственно перед использованием. На пламени кратковременно прожигают предметные и покровные стекла, стеклянные шпатели и палочки, фарфоровые ступки и пестики, горлышки колб, пробирок, бутылок, а также ватные пробки при пересевах культур и разливах сред. В пламени погибают и вегетативные клетки и споры микроорганизмов.
При работе со шприцами желательно использовать одноразовые стерильные шприцы.
Термостойкие приборы для культивирования микроорганизмов а также детали к этим приборам, резиновые пробки и шланги стерилизуют в автоклаве. При этом емкости завертывают в бумагу. Режим автоклавирования выбирают в соответствии с термостойкостью материала, из которого сделан прибор.
Некоторые предметы (металлические инструменты, мелкие стеклянные детали, мембранные фильтры) иногда стерилизуют длительным (в течение 20-30 мин) кипячением в дистиллированной воде. Металлические и стеклянные предметы лучше всего кипятить в специальных закрытых сосудах – стерилизаторах. Можно использовать для этих целей и металлическую посуду. Мембранные фильтры обычно кипятят в колбе или химическом стакане, закрытых ватными пробками. Однако этим способом стерилизации в микробиологической практике пользуются редко в связи с тем, что длительное кипячение может повредить материал, а сокращение времени кипячения может не обеспечить стерильность, так как споры некоторых микроорганизмов способны сохранять жизнеспособность даже после длительного кипячения.
Надежность стерилизации при кипячении может быть увеличена внесением в воду какого-либо бактерицидного средства: 2%-го формальдегида, 1%-й бриллиантовой зелени или 0,1%-й сулемы. Но в этом случае возможно загрязнение биоцидами стерилизуемых предметов.

Список использованных источников

1. https://www.himikatus.ru/

2. Никольский Б.П., Григоров О.Н., Позин М.Е. Справочник химика, Госхимиздат, 1967 г.

3. ГОСТ 25336-82 «Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры».

Источник

Как отмыть предметные стекла

· преаналитический этап (подготовка пациента к исследованию, забор биоматериала, подготовка препарата)

· аналитический этап (фиксация и окрашивание)

· постаналитический этап (микроскопическое исследование клеточных элементов)

Особенности преаналитического этапа при гематологических и цитохимических исследованиях состоят из:

1. Правильной и качественной подготовки стекол для исследования.

2. Правильно приготовленного препарата.

3. Правильно подобранных и использованных антикоагулянтах.

4. Условий хранения нефиксированных препаратов.

5. Подбор фиксаторов и красителей для фиксации и окраски препаратов, режимов для фиксации и окраски.

6. Использование «забуференной» воды для приготовления рабочих растворов.

Одна из составляющих преаналитического этапа – это правильная и качественная подготовка стекол для исследования.

Популярные посты

Недавние посты

Поиск по тегам

Мы в соцсетях